细胞荧光染色观察及荧光显微镜使用说明

    实验目的与教学要求

    1.掌握荧光显微镜的成像基本原理及其使用；

    2.掌握暗视野显微镜的成像基本原理及其使用。

    一、荧光显微镜的成像原理

    荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。

    什么是荧光?

    物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。

    即：物质吸收短波光，发射出的长波光。

    荧光的性质

    保持固有的荧光特性

    荧光波长＞激发波长

    荧光强度极小于激发光的强度

    有不同程度的衰减

    荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率

    荧光显微镜的优点和用途(生物秀仪器频道www.bbioo.com)

    优点：

    检出能力高

    对细胞的刺激小

    能进行多重染色

    用途：

    物体构造的观察

    荧光的有无、色调比较进行物质判别

    发荧光量的测定对物质定性、定量分析

    荧光素的特性

    荧光显微镜技术在生命科学研究中的应用

    1.对细胞结构或组分的定性、定位、半定量研究。

    2.作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。

    二、暗视野显微镜的成像原理

    通过特殊的暗视野聚光器，使照明光线改变途径，不直接进入物镜，而是倾斜地照射到样品上，由样品表面的绕射光线入射到物镜内，产生样品的衍射图象。

    三、试剂与器材

    青蛙、洋葱、人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片(HE染色)

    甲醇、1‰丫啶橙、滤纸、吸管、载玻片

    荧光显微镜、暗视野显微镜、普通光学显微镜

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